Набор для количественного определения уровня экспрессии гена WT1  методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме «реального времени».

Набор реагентов рассчитан на проведение исследования в количественном формате для 24 биообразцов в двух повторах (132 ПЦР-реакции, включая контрольные).

Дополнительная информация о маркере:

На сегодняшний день мониторинг пациентов с ОМЛ после проведения терапии с помощью молекулярно-биологических методов на предмет наличия остаточных клеток лейкозного клона (мониторинг минимальной остаточной болезни, МОБ) является наиболее важным методом в оценке эффективности терапии. Однако применимость данного подхода ограничена наличием у пациентов подходящих  для детекции с помощью количественной ПЦР в режиме «реального времени» молекулярно-биологических маркеров, характерных для лейкемических клеток, таких как химерные гены PML-RARA, CBFB-MYH11, AML1-ETO (RUNX1-RUNX1T1) или специфические мутации в генах FLT3 и NPM1. 

Однако около половины больных ОМЛ лишены подобных молекулярно-генетических аберраций. Именно для этой группы пациентов внедрение альтернативных подходов контроля элиминации опухолевых клеток является ключевым фактором в оценке эффективности терапии. Одним из таких подходов является использование количественной ПЦР в режиме «реального времени» (РТ-ПЦР)  для детекции транскриптов генов, экспрессия которых значительно выше в лейкозных клетках по отношению к нормальным клеткам костного мозга и периферической крови. Среди возможных генов-кандидатов наиболее описан  WT1 (Wilm’s tumor).

Ген WT1 расположен в 11р13 локусе и кодирует транскрипционный фактор типа «цинковые пальцы», выполняющий в клетке целый спектр функций в зависимости от варианта сплайсинга мРНК. Одной из основных функций WT1 в ходе нормального гемопоэза является индукция дифференцировки гепомоэтических стволовых клеток в миело-моноцитарном направлении. Так же WT1 в норме является опухолевым супрессором и отвечает за созревание мРНК.

Гиперэкспрессия гена WT1 была обнаружена при ряде заболеваний крови опухолевой природы, в том числе и при остром миелобластном лейкозе (ОМЛ). Высокая экспрессия WT1 встречается у более половины пациентов с ОМЛ и является фактором неблагоприятного прогноза заболевания и высокого риска развития рецидива (3). Поскольку методом РТ-ПЦР  можно выявить четкие различия в уровне транскрипта WT1 в нормальных и лейкозных клетках, экспрессия WT1 может являться полезным маркером оценки минимальной остаточной болезни у пациентов при отсутствии крупных хромосомных аномалий или других мутаций, характерных для клеток лейкозного клона.   

Публикации:

1. Yang L, Han Y, Suarez Saiz F, Minden MD. A tumor suppressor and oncogene: the WT1 story. Leukemia. 2007 May;21(5):868-76. Epub 2007 Mar 15.
2. Leif W. Ellisen, Nadia Carlesso, Tao Cheng, David T. Scadden, and Daniel A. Haber  The Wilms tumor suppressor WT1 directs stage-specific quiescence and differentiation of human hematopoietic progenitor cells. EMBO J. 2001 Apr 17; 20(8): 1897–1909.
3. Liu-Yin, J. et al. (2008) Predictive value of minimal residual disease (MRD) monitoring by RQ-PCR in WT1 positive patients entered in the UK MRC AML-15 Trial. Blood 112, 259.
4.  GabertJ, Beillard E  et al. Standardization  and quality control studies of real-time quantitative  reverse transcriptase polymerase chain reaction of fusion gene transcripts for residual disease detection in leukemia – a Europe Against Cancer program. Leukemia. 2003 Dec;17(12):2318-57.
5. van der Velden, V.H., Hochhaus, A., Cazzaniga, G., Szczepanski, T., Gabert, J., and van Dongen, J.J. (2003) Detection of minimal residual disease in hematologic malignancies by real-time quantitative PCR: principles, approaches, and laboratory aspects. Leukemia 17, 1013.
6. Beillard, E. et al. (2003) Evaluation of candidate control genes for diagnosis and residual disease detection in leukemic patients using ‘real- time’ quantitative reverse-transcriptase polymerase chain reaction (RQ- PCR) - a Europe against cancer program. Leukemia 17, 2474.

Доступные продукты:

• Набор WT1 RQ Kit, 24 исследования                                                            кат. номер IG-RQ-17-24
  Набор WT1 RQ Kit, 48 исследований                                                            кат. номер IG-RQ-17-48
  Инструкция
  MSDS

Доступные комплектующие набора:

• Калибраторы WT1                                                                                            кат. номер  IG-C-17
• Калибраторы ABL                                                                                             кат. номер IG-C-100
• Набор синтетических олигонуклеотидов WT1(Primer Mix)                            кат. номер IG-O-17
• Набор синтетических олигонуклеотидов ABL (Primer Mix)                            кат. номер IG-O-100
• Реакционная смесь x2,5 (PCR Mix)                                                                  кат. номер IG-RM-1

Дополнительные реагенты:
Раствор для консервации РНК Blood RNA stabilizer                                             кат. номер IG-RSB
Набор реагентов для выделения РНК TriZ Reagent Kit                                        кат. номер IG-TRK-100
Набор для синтеза кДНК ReverZyme                                                                     кат. номер IG-RT-1
Реагент Erythrocyte Lysis Solution                                                                           кат. номер IG-TRL-100

Расценки:   по запросу

Реагенты не являются медицинским изделием и предназначены для использования исключительно в исследовательских целях (RUO)

Разработка данного набора реагентов осуществлялась при поддержке Фонда содействия инновациям